免疫组织化学技术是利用免疫学抗体与抗原结合的原理以及细胞化学技术对组织、细胞特定抗原或抗体进行定位定量研究的技术。它广泛应用于生物学、组织解剖学、病理学等［1］。做免疫组化不外乎两种方法:漂片法或贴片法［2］。然而，前者容易烂片，不适合做脑片等大而易碎的组织;后者方法较好，但为了保持良好的结果和节省抗体，常常需要免疫组化笔。免疫组化笔无论是国产还是进口，都有下油不利或下油过多、污染片子、隔水性差、圈片数量少等弊病，且价格昂贵。我们通过多次实验，摸索出一种自制的简易组化笔，其防水性好、价格低廉、可保证免疫组化效果。

1制作免疫组化笔材料与方法

1.1材料

1.1.1实验用品和器械树胶2ml（中国医药集团上海化学试剂公司）、一次性筷子数根、卫生棉少许、手术刀片一个、30张贴有脑片的载玻片（每张载玻片2张脑片）、0.05M的PBS、BDNF抗体、0.3%Triton、ABC试剂盒、湿盒、DAB显色剂、恒温细胞培养箱、冰箱、普通显微镜等。

1.1.2实验分组实验分三组:甲组用美国进口免疫组化笔画圈;乙组用国产一般免疫组化笔（北京中杉公司生产）画圈;丙组用自制简易组化笔画圈。每组15张载玻片（30张脑片）。

1.2方法

1.2.1免疫组化笔的制作方法将一次性筷子从中间折短，分成两根，削尖一端，把尖端用少许棉花裹紧，这样就制成了一只简易笔。

1.2.2代替免疫组化笔的方法用一小瓶倒入2ml树胶，将自制简易笔蘸少量树胶，围绕片子周围0.2cm处画圈，不能覆盖片子。

1.2.3免疫组化ABC法［3］（1）0.05MPBS漂洗5min×3次;（2）3%H2O2/0.05MPBS漂洗，室温30min;（3）0.05MPBS漂洗5min×3次;（4）5%羊血清37℃30min;（5）免疫抗体BDNF（1:500）4℃过夜;（6）0.05MPBS漂洗5min×3次;（7）Ⅱ抗37℃1.5h;（8）0.05MPBS漂洗5min×3次;（9）AB复合物37℃1.5h;（10）0.05mPBS漂洗5min×3次;（11）DAB显色5～10min;（12）三蒸水漂洗5min×3次;（13）梯度酒精脱水，二甲苯通透，树胶封片，镜下观察。

1.2.4结果观察及统计学处理观察整个实验过程中用自制简易组化笔画圈的防水性效果;镜下观察BDNF免疫阳性反应物的表达情况，将所得数据进行统计学处理、分析。

2结果

2.1三种免疫组化笔防水率的比较美国产免疫组化笔的防水率为90%;国产免疫组化笔的防水率为80%;而自制免疫组化笔的防水率可达98%。

2.2三种免疫组化笔对BDNF免疫阳性结果的影响镜下大体观察发现:用自制免疫组化笔画圈的切片阳性结果良好，而用美国产免疫组化笔画圈的切片虽有阳性结果，但片子周围有污染现象。